Clonación y expresión del gen que codifica para la enzima 1-aminociclopropano-1carboxilato sintasa de jitomate (Lycopersicum esculentum) en Escherichia coli.

Abstract

El objetivo de este trabajo fue la clonación y expresión de la enzima 1- aminociclopropano-1-carboxilato sintasa (ACCS) en Escherichia coli. Esta enzima forma parte de la ruta de la biosíntesis del etileno en plantas y cataliza la transformación de Sadenosil- metionina en ácido 1-aminocicloprano-1-carboxílico (ACC). Se ha demostrado que el ACC ayuda a la producción exógena de etileno en las plantas superiores y podría sustituir el uso del ácido 2-cloroetilfosfónico. A través del uso de endonucleasas de restricción se clonó el fragmento de ADN que codifica para la enzima ACCS en el vector pColdI. Bacterias quimiocompetentes de E. coli se transformaron con este ADN recombinante mediante choque térmico. La sobreexpresión de la proteína se realizó al inducir cultivos que ya contaban con el ADN recombinante de ACCS clonado en el vector pColdI y se visualizó mediante una electroforesis de gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico (SDS). La proteína se observó en un peso aproximado de 48 kDa tal y como se hace referencia bibliográficamente, su expresión fue abundante en comparación con los cultivos que no se indujeron y con los controles que no contenían el ADN recombinante.